Selektiv- und Differentialmedium für Nachweis und Auszählung coliformer Bakterien in Wasser, Milch, Molkereiprodukten und Lebensmitteln
Vorbereitung: geben Sie 41,5 g des Mediums in einen Liter destilliertes Wasser. Gut mischen und durch Erhitzen unter häufigem Rühren auflösen. Kochen Sie eine Minute bis zur vollständigen Auflösung. NICHT ÜBERHITZEN. Abkühlen auf 45ºC und sofort verwenden. Falls gewünscht, kann das Medium auch 15 Minuten bei 118 ° C im Autoklaven sterilisiert werden. Hartham zeigte, dass Medien, die nur durch Kochen hergestellt wurden, dieselben Ergebnisse wie autoklavierte Medien ergaben. Das vorbereitete Medium sollte bei 8-15 ° C gelagert werden. Die Farbe des Mediums ist purpurrot. Das dehydratisierte Medium sollte homogen, frei fließend und beige rötlich sein. Wenn es physische Änderungen gibt, entsorgen Sie das Medium.
Nutzung: das verwendete VIOLET RED BILE AGAR MIT LACTOSE (VRBL), das den Farbstoff Galle und Violett Rot enthält, basiert auf MacConkey Agar (Kat. APP1052) zum Nachweis und zur Zählung von Lactose-fermentierenden Bakterien und der Differenzierung von Coliformen oder Coliaerogenes von Nicht-Lactose-fermentierenden Organismen in Milchprodukten, Wasser und Lebensmitteln. Pepton liefert Stickstoff, Vitamine, Mineralien und Aminosäuren, die für das Wachstum wesentlich sind. Hefeextrakt ist eine Quelle für Vitamine, insbesondere der B-Gruppe. Laktose ist das fermentierbare Kohlenhydrat, das Kohlenstoff und Energie liefert. Gallensalze und Kristallviolett hemmen grampositive Bakterien. Neutralrot ist ein pH-Indikator. Natriumchlorid liefert wesentliche Elektrolyte für den Transport und das osmotische Gleichgewicht. Bakteriologischer Agar ist das Verfestigungsmittel. Es ist zweckmäßig, die Gießplattenmethode zu verwenden, indem 1 ml der gewünschten Verdünnung in eine sterile Petrischale gegeben wird, 15 ml des Mediums zugegeben werden, auf 45–50 ° C abgekühlt werden und vor dem Erstarren leicht rotieren. Nach dem Verfestigen gießen Sie eine zweite Schicht des Mediums bis zu einer Tiefe von 5 mm. Erstarren lassen. Bei Temperaturen von 35 ± 2 ° C für 18 bis 24 Stunden inkubieren. ISO 4832 empfiehlt die Zubereitung von zwei Schalen für das flüssige Produkt und / oder aus jeder gewählten Verdünnung. Mit einer sterilen Pipette 1 ml Flüssigprodukt oder die entsprechenden Verdünnungen in die Mitte jeder Schüssel geben. Verwenden Sie eine andere sterile Pipette, um jede Verdünnung in das Geschirr zu beimpfen. Gießen Sie etwa 15 ml VRBL-Medium bei 44 ° C bis 47 ° C in jede Petrischale. Die Zeit zwischen dem Ende der Herstellung der Ausgangssuspension (oder der 10-1-Verdünnung, wenn das Produkt flüssig ist) und dem Zeitpunkt, zu dem das Medium in das Geschirr gegossen wird, sollte 15 Minuten nicht überschreiten. Das Inokulum vorsichtig mit dem Medium mischen und die Mischung mit den Petrischalen, die auf einer kühlen horizontalen Oberfläche stehen, erstarren lassen. Außerdem eine Kontrollplatte mit dem Medium zur Kontrolle der Sterilität vorbereiten. Nach vollständiger Verfestigung gießen Sie etwa 4 ml VRBL-Medium bei 44 bis 47 ° C auf die Oberfläche des beimpften Mediums. Erstarren lassen, wie oben beschrieben. Die vorbereiteten Schalen umdrehen und im Brutschrank bei 30 ° C oder 37 ° C (wie vereinbart) für 24 Stunden ± 2 Stunden inkubieren. Laktosefermenter bilden rote Kolonien mit rot-violetten Halos. Gelegentlich können sich die Kokken des Darmtrakts als kleine, punktförmige rote Kolonien entwickeln.
Mikrobiologischer Test:
Die folgenden Ergebnisse wurden bei der Leistung des Mediums aus Typkulturen nach Inkubation bei einer Temperatur von 35 ± 2ºC erhalten und nach 18-24 Stunden gemäß ISO 4832 beobachtet. Inkubation bei 30 oder 37ºC und beobachtet nach 24 ± 2 Stunden
Gemäß 11133 (24 h / 30 ° C) Produktivität, Selektivität und Spezifität:
Lagerung: Nach dem Öffnen das pulverisierte Medium geschlossen halten, um Feuchtigkeit zu vermeiden
Zusammensezung: (g/l)
Lagerung: Kühl und trocken lagern.