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Art.Nr. APP4051A/0.1
TRItidy G™ Ready-to-use - Lösung zur gleichzeitigen Isolierung von RNA, DNA und Proteinen

TRItidy G ™ ready-to-use solution for the simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins

Laborbedarf,Biochemikalien,Molekularbiologie,TRItidy G™

Spezifikation: monophasisches Reagenz (enthält Phenol und Guanidinthiocyanat)geeignet für kleine und große Probenfür menschliche, tierische, pflanzliche oder bakterielle ProbenIsolierung intakter Gesamt-RNA aus Gewebe und Zellen, sequentielle Präzipitation von DNA und Proteinverbesserte Version der 'single-step' RNA-Isolierungsmethode nach Chomczynski & SacchiIsolierung großer und kleiner RNA-Spezies (0,1 - 15 kb) mit sehr hoher ReinheitDaten:eClass: 32150000HS-Nr.: 38220000Gefahrenhinweise:UN2821Klasse / Verpackungsgruppe: 6.1/IIADR: 6.1/IIIMDG: 6.1/IIIATA: 6.1/IILagerung: 2-8°CHaltbarkeit: 6 MonateLGK: 6.1BWGK: 2Gefahrstoffsymbole: GHS05 GHS06 GHS08H-Sätze: EUH032,H302,H311+H331,H314,H341,H412P-Sätze: P280,P301+P330+P331,P302+P352,P308+P313Signalwort: GefahrVersand: RTProdukt unterliegt der Chemikalienverbotsverordnung (ChemVerbV). Es muss vom Kunden eine Erklärung zur ChemVerbV vorliegen.TRItidy G™ ist ein eingetragenes Warenzeichen der AppliChem GmbHSicherheitsdatenblatt:https://www.itwreagents.com/download_file/sds/A4051/de/sds_A4051_de.pdfKommentar:Gleichzeitige Isolation von RNA, DNA und Proteinen aus biologischen Proben wurde 1993 erstmals vorgestellt. Die Methode basierte auf phenolhaltigen Reagenzien und auf Guanidinthiocyanat. Die gewonnenen Isolate können für Northern-, Southern- und Westernblotting als auch für PCR, RT-PCR und enzymatische Assays benutzt werden. Die gesamte Rückgewinnung von DNA aus Proben der RNA und Proteingewinnung macht es möglich, innerhalb der Versuche gegen die DNA-Menge zu normalisieren, anstatt den variableren Gesamt-RNA-Gehalt, die Proteinmenge oder das Probengewicht zu verwenden.TRItidyG™ ist eine mono-Phasen Reagenz, die auf der Chomczynski Methode basiert. Es ist zusätzlich modifiziert, um eine höhere Reinheit von DNA, RNA und Proteinen zu erhalten. Zuerst wird die RNA bei der sauren Extraktion in der wässrigen Phase zurückgehalten, während DNA und Proteine in der organischen bzw. Interphase zurückbleiben. Die DNA wird durch Ethanolfällung aus der Interphase/organischen Phase isoliert, während die Proteine aus der verbleibenden organischen Phase kommen.Vorteile von TRItidy G™RItidyG™ erlaubt eine Ein-Schritt-Isolierung aus biologischen Probenmono-phasische ReagenzKeine Säulen nötig zur Extraktion der Nukleinsäuren.Schnelle ProzedurLeicht zu reproduzierenEignet sich für kleine und großeProbenmengen (human, tierisch, pflanzlich,bakteriell).Übersicht für die simultane Extraktion von RNA, DNA und Proteinen:Homogenisieren in TRItidyGZentrifugierenRNA-Fällung mit Isopropanol aus der wässrigen Phase ...... Zentrifugieren .... RNA waschen .... Zentrifugieren .... Lufttrocknen und Lösen der RNADNA-Fällung mit Ethanol aus der organischen Phase/Interphase (untere Phase) ..... Zentrifugieren .... DNA waschen .... Zentrifugieren .... Lufttrocknen und Lösen der DNAProteinfällung mit Isopropanol aus der Phenol-/Ethanolphase (Phenol/Ethanol-Überstand) ..... Zentrifugieren .... Protein waschen .... Zentrifugieren .... Vakuumtrocknen und Lösen des ProteinsVorbereitung der Proben:Abhängig vom Probentyp sollte die Homogenisierung nach unten stehendem Protokoll erfolgen. Das Volumen der Probe sollte nicht mehr betragen als 1/10 des Volumens von TRItidyG™Gewebe: Gewebe wird homogenisiert in ca. 1 ml TRItidyG™ pro 50 - 100 mg GewebeZellkulturzellen (Monolayer): Zellen werden in 1 ml/10 cm2 (3.5 cm Durchmesser) Platte, nach Abnahme des Mediums lysiertSuspensionszellen: Vor Zugabe der Reagenz müssen die Zellen per Zentrifugation gesammelt werden (1 ml TRItidyG™ pro 1-5 x 106 Zellen, Bakterien bis zu 1 x 107)Blutproben,Serum oder andere biologische Flüssigkeiten*: Hinzugabe von 750 ?l TRItidyG™ pro 250 ?l Probenvolumen (*Anmerkung: Biologische Flüssigkeiten mit hohem Proteinanteil oder anderen Substanzen (z.B. Gesamtblut) sollten 1:1 mit RNase-freiem Wasser für die Molekularbiologie (vorgeschlagenes Produkt: APP7398A) verdünnt werden)Phasentrennung:Homogenisierung der ProbeInkubationszeit(5minHinzufügen von 0,2ml Chloroform zum LysatZusätzliche Inkubation von 10minZentrifugieren des Lysates bei 12000g und 4°C für 15minAufreinigungsprotokoll für RNA, DNA und PROTEINERNA-Isolierung: 1.Transferieren der wässrigenPhase in ein neues Gefäß 2.Zugabe 1:1 Isopropanol 3.Fällen der RNA auf Eis (15 min) und Zentrifugieren 4.Waschen und Lufttrocknen 5.Lösen des Pellets in 20 ?l DEPC-behandeltem WasserDNA-Isolierung: 1.Zugabe von Ethanol und Inkubation (5 min) 2.Zentrifugieren und Abnahme des Überstandes (Protein) 3.Waschen mit Natriumcitrat 0,1M und Zentrifugieren (5 min) 4.Lufttrocknen der DNA und Lösen in ca. 0,5 ml 1X TEProteinisolierung: 1.Zugabe von Isopropanol zum Überstand (2:1) 2.Zentrifugieren (10 min) 3.Waschen des Proteinpräzipitates mit Guanidinhydrochlorid 0,3M und Zentrifugieren (5 min) 4. Lufttrocknen des Präzipitates und Lösen in 1% SDSZugehörige Produkte:Chloroform BioChemica APP3691ADEPC BioChemica APP0881AEthanol absolut für die Molekularbiologie APP3678AGuanidinhydrochlorid für die Molekularbiologie APP1106A2-Propanol BioChemica APP3465SDS für die Molekularbiologie APP2263ATE - Puffer (1X) pH 7,5 für die Molekularbiologie APP3837AWasser für die Molekularbiologie APP7398

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