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Gruppe:Laborverbrauchsmat.
Untergruppe:Zellkultur,Testkits,Proliferation Kit
Artikel:Zellproliferations Kit XTT für 1000 Tests

Cell Proliferation Kit XTT for 1000 tests

Laborbedarf,Zellkutur,Proliferationstestkit
Bezeichnung:

Kit für die Quantifizierung der Zellproliferation und Lebensfähigkeit ohne Einsatz von radioaktiven Isotopen. 1000Tests

Zellproliferationskits werden üblicherweise in der Zellkultur sowoh als auch zur Untersuchung der Wachstumsfaktoren, Zytokine und Medienkomponenten, als auch zum Screenen auf zytotoxische Wirkstoffe und lyphocytenaktivierungen eingesetzt! Die vMethoden der Vergangenheit waren oftmals sehr komplex und erforderten die Verwendung radioaktiver Isotope. Seit den 50iger Jahren fand man , dass dass lebende Zellen Tetrazoliumsalzen wie MTT und später XTT in gefärbte Formazanverbindungen umwandeln.Das biochemische Verfahren basiert auf der Aktivität von mitochondrialen Enzymen, die kurz nach dem Zelltod inaktiviert werden. Diese Methode erwies sich als sehr effizient bei der Beurteilung der Lebensfähigkeit von Zellen.Während die Verwendung von MTT eine unlösliche Formazanverbindung erzeugte, die das Auflösen des Farbstoffs zur Messung erforderte, erzeugte die Verwendung von XTT einen löslichen Farbstoff. Die Verwendung von XTT vereinfacht das Verfahren zur Messung der Proliferation erheblich und ist daher eine hervorragende Lösung zur Quantifizierung von Zellen und ihrer Lebensfähigkeit ohne Verwendung radioaktiver Isotope. Dieses Kit wurde entwickelt, um die Zellproliferation in Reaktion auf verschiedene Wachstumsfaktoren, Zytokine und Nährstoffkomponenten zu testen. Darüber hinaus eignet es sich zum Testen der Zytotoxizität von Materialien wie TNF oder anderen Wachstumsinhibitoren. XTT kann als nicht radioaktiver Ersatz für zytotoxische Tests verwendet werden, die auf der Freisetzung von 51Cr aus Zellen mit nicht geringerer Empfindlichkeit beruhen. Die Vorteile dieses Kits lassen sich mit den folgenden Attributen zusammenfassen:

  • Einfach zu verwenden: Es gibt keine Erfordernis zusätzlicher Reagenzien und oder Zellwaschverfahren
  • Geschwindigkeit: Einstufiger Prozess mit Ergebnissen innerhalb von 2 bis 5 Stunden
  • Empfindlichkeit: Kann auch bei niedrigen Zellkonzentrationen getestet werden
  • Genauigkeit: Die Farbstoffabsorption ist proportional zur Anzahl lebender Zellen In jeder Vertiefung
  • Sicherheit: Radioaktive Isotope sind nicht erforderlich
  • Komfort: Mit Ausnahme eines Spektrophotometers (ELISA-Readers) sind keine Instrumente erforderlich. Der gesamte Assay kann direkt in einer Mikrotiterplatte durchgeführt werden
  • XTT Reagenz (10 x 5 ml)
  • Aktivierungsreagenz (2 x 0,5 ml), enthält PMS (N-Methyldibenzopyrazinmethylsulfat)
  • Lagerung : -20°C, Stabilität min. 1a
  • Beide sterilen Lösungen sollten gefroren gelagert und nicht dem Licht ausgesetzt werden. Um Gefrier-Auftau-Zyklen zu vermeiden, wird empfohlen, die Lösungen nach dem ersten Auftauen zu aliquoten. Hinweis: Wenn sich in den Lösungen Sediment befindet, erwärmen Sie die Lösungen auf 37 ° C und schwenken Sie sie vorsichtig, bis klare Lösungen erhalten werden
  • Test-Prinzipien:

    • Der Test basiert auf der Fähigkeit metabolisch aktiver Zellenzur Reduzierung des Tetrazoliumsalz XTT zu orange gefärbte Formazanverbindungen. Der gebildete Farbstoff ist wasserlöslich und die Farbstoffintensität kann bei einer gegebenen Wellenlänge in einem Spektrophotometer abgelesen werden. Die Intensität des Farbstoffs ist proportional zur Anzahl der metabolisch aktiven Zellen. Die Verwendung von Multiwell-Platten und eines ELISA-Readers ermöglicht das Testen einer großen Anzahl von Proben und das Erhalten schneller Ergebnisse. Das Testverfahren umfasst die Kultivierung von Zellen in einer 96-Well-Platte, die Zugabe des XTT-Reagens und die Inkubation für 2 bis 24 Stunden. Während der Inkubationszeit bildet sich eine orange Farbe, deren Intensität mit einem Spektrophotometer, in diesem Fall einem ELISA-Reader, gemessen werden kann. Je größer die Anzahl der aktiven Zellen in der Vertiefung ist, desto größer ist die Aktivität der mitochondrialen Enzyme und desto höher ist die Konzentration des gebildeten Farbstoffs, der dann gemessen und quantifiziert werden kann.

    Verfahren:

  • 1.Die Zellen werden in einer 96-well-Zellkuturplatte kiultiviert. Dazu geben Sie 100ml vom Wachstumsmedium. Die Zellen werden nun bei 37°C im CO²-Brutschrank inkubiertIn den meisten Fällen kann der test nach 24-96 h verwendet werden. Jede Platte sollte auch Blanks (Medium ohne Zellen) enthalten
  • 2. Die XTT-Reagenzlösung und die Aktivierungslösung unmittelbar vor der Verwendung in einem 37 ° C-Bad auftauen. Vorsichtig schwenken, bis klare Lösungen erhalten werden
  • 3.Zur Herstellung einer Reaktionslösung, die für eine Platte ausreicht (96 Vertiefungen), 0,1 ml Aktivierungslösung zu 5 ml XTTreagent hinzufügen
  • 4. Zugabe von 50µl der Reaktionslösung in jedes Well der 96-er Platte und die Platte in Abhängigkeit von der Zelldichte und den Eigenschaften der zu analysierenden Zellen 2 bis 24 Stunden in einem Inkubator inkubieren. (in der Regel sind 2 bis 5 Stunden ausreichend)
  • 5. Schütteln Sie die Platte vorsichtig, um den Farbstoff gleichmäßig in den Vertiefungen zu verteilen
  • 6. Messen Sie Absorption der Proben gegen die Blindkontrolle (blamks) mit einem Eliza-Reader bei Wellenlängen von 450-500nm. Im Falle der der Referenzmessung (zur Mesung der unspezifischen Werte) nutzen Sie eine Wellenlänge von 630-690nm un ziehen Sie die Werte von denen mit 450-500nm ab.
  • 7. Die Verwendung mehrerer Blanks ist angberacht!
  • Hinweise:

    • Tauen Sie die Reagenzien erst kurz vor dem Test auf
    • Wenn der Test zu sensitiv ist, verwenden Sie geringere Konzentrationen Ihrer ZellenDie Inkubationszeit der Zellen ist abhängig vom Zelltyp, testen Sie diese ausreichend

    Lieferung auf Trockeneis!!

    HS: 38220000

    mit Trockeneispauschale

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